發(fā)布時(shí)間： 2021-03-11 點(diǎn)擊次數(shù)： 729次
胰島素ELISA試劑盒是一種基于夾心法原理的固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。反應(yīng)板上的微檢測(cè)孔涂有單克隆抗體，可與胰島素分子上*的抗原位點(diǎn)結(jié)合。將含有內(nèi)源性胰島素的患者樣本與生物素標(biāo)記的抗胰島素抗體酶復(fù)合物在包切孔中孵育。
孵育后，用洗滌液洗滌未結(jié)合的酶復(fù)合物。二次升溫時(shí)，鏈親和過(guò)氧化物酶復(fù)合物與生物素抗胰島素抗體結(jié)合，結(jié)合量與樣品中胰島素濃度成正比。顯示的顏色強(qiáng)度與添加底物后患者樣本中胰島素的濃度成正比。
大鼠胰島素ELISA試劑盒的使用方法如下：
實(shí)驗(yàn)前，所有試劑應(yīng)平衡至室溫，試劑不能直接溶解于37。配制試劑或樣品時(shí)，應(yīng)充分混合，混合時(shí)應(yīng)避免氣泡。實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量。如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)稀釋樣品，使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。計(jì)算時(shí)，應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1、加樣：分別設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔和待測(cè)樣品孔。向空白孔中加入樣品稀釋劑100，分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100。注意不要有氣泡。加入樣品時(shí)，將樣品加入酶標(biāo)板底部，盡量不要碰到孔壁，輕輕搖勻。在酶標(biāo)板上加蓋或膜，37℃保存2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性，請(qǐng)每次實(shí)驗(yàn)使用新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2、棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液100（臨用前配制），酶標(biāo)板加上覆膜，37溫育1小時(shí)。
3、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4、每孔加檢測(cè)溶液B工作液（臨用前配制）100，加上覆膜，37溫育1小時(shí)。
5、棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
6、向每個(gè)孔、酶標(biāo)板和37號(hào)包衣中加入90底物溶液，避免出現(xiàn)淺色（反應(yīng)時(shí)間控制在15-30分鐘，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔的前3-4個(gè)孔有明顯的藍(lán)色梯度，后3-4個(gè)孔的藍(lán)色梯度不明顯時(shí)終止反應(yīng)）。
7、每孔加終止溶液50，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8、立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度（值）。
好了，以上便是關(guān)于胰島素ELISA試劑盒的相關(guān)內(nèi)容介紹了。
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